¿Quién inventó la HPLC?
El botánico Ruso: Mikhail Semyonovich Tsvet es a quien se le reconoce por la invención de la cromatografía de líquidos con columnas. En 1901, presentó un método de cromatografía de adsorción para separar los pigmentos vegetales con éter de petróleo en un tubo de vidrio estrecho y lleno de carbonato de calcio. Tsvet publicó su trabajo en 1903 y probó 126 adsorbentes en polvo diferentes. Fue la primera persona en utilizar el término «cromatografía» en sus artículos publicados en 1906.
40 años más tarde, en 1941, Archer John Porter Martin y Richard Lawrence Millington Synge publicaron un nuevo tipo de cromatografía de partición que utilizaba gel de sílice en las columnas para mantener el agua inmóvil mientras el cloroformo fluía a través de la columna con el fin de separar los aminoácidos.
Este experimento fue el comienzo del desarrollo de la HPLC, aunque aún se necesitarían 30 años más para empezar a utilizar bombas que empujaran la fase líquida a través de la columna empaquetada.
En la actualidad, laboratorios de todo el mundo utilizan la HPLC para identificar y cuantificar componentes químicos no volátiles y semi volátiles en muestras líquidas.
Principios básicos
Analito: compuesto(s) de interés para la detección mediante análisis de HPLC.
Fase móvil: fase en movimiento compuesta por disolventes o eluyentes que fluyen desde que se introducen hasta que finaliza la detección.
Fase estacionaria: fase fija en la que se produce la separación física de los analitos.
Caudal: rapidez a la que fluye la fase móvil con respecto al tiempo.
Tiempo de retención: tiempo entre la inyección de las muestras y la señal de picos máxima del analito en un cromatograma.
Eficacia: expresada como el número de placas teóricas, una medida clave para cuantificar la eficacia de una separación.
Resolución: capacidad para distinguir entre picos y el principal aspecto que tener en cuenta en cualquier separación.
Selectividad: capacidad para separar dos analitos.
Volumen de vacío: todo el volumen de una columna que no está ocupado por la fase estacionaria.
Límite de detección: cantidad más pequeña de un analito que se puede detectar de forma fiable.
Límite de cuantificación: cantidad mínima o máxima de un analito que se puede cuantificar de forma fiable.
Reactivos para cromatografía y para espectroscopia
Espectro obtenido por descomposición de la luz blanca a través de un prisma de vidrio
Los reactivos analíticos son compuestos o mezclas químicos indicados para los ensayos analíticos cualitativos y cuantitativos. Deben cumplir las normas internacionales más estrictas y tener la máxima pureza y las mínimas impurezas.
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